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細胞轉(zhuǎn)染的幾種方法

 更新時間:2022-03-24 點擊量:2042
  細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独换瘜W(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
 
  細胞轉(zhuǎn)染的幾種方法:
 
  1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
 
  陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將包裹入內(nèi),形成DNA脂復(fù)合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前實驗室方便的轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細胞類型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
 
  2.電穿孔轉(zhuǎn)染法
 
  電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下,高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。
 
  3.病毒感染
 
  對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系建議用病毒感染,此法可以快速感染,檢測成功率高。
 
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