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RNA提取的原理是什么?

 更新時(shí)間:2023-09-18 點(diǎn)擊量:2203

不同組織RNA提取原理是將細(xì)胞裂解,釋放出 RNA,并通過不同方式去除蛋白,DNA 等雜質(zhì),最終獲得高純度 RNA 產(chǎn)物的過程。常用的RNA提取方法是Trizol方法,Trizol內(nèi)含異硫氰酸胍能迅速破碎細(xì)胞,同時(shí)使核蛋白復(fù)合體中的蛋白變性并釋放出核酸,由于釋放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同,且分別位于中間相和水相,從而使DNA和RNA得到分離,取出水相后,通過有機(jī)溶劑 (氯仿) 抽提及異丙醇沉淀,可得到純凈RNA。那么你知道RNA提取的原理是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、常見RNA提取樣本細(xì)胞裂解方法

1.異硫氰酸胍/苯酚(Trizol)

原理:苯酚裂解細(xì)胞,變性蛋白,但不能wan全抑制RNase活性。異硫氰酸胍迅速溶解蛋白,破碎細(xì)胞,解離核蛋白復(fù)合體,釋放核酸,并抑制RNase活性,保持RNA完整性。苯酚是酸性酚,后續(xù)加入氯仿進(jìn)行有機(jī)萃取。

特點(diǎn):得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。但產(chǎn)生有機(jī)試劑廢物。

適用范圍:次級(jí)代謝較少的植物組織,如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織、微生物。

2.胍鹽/β-巰基乙醇法:

原理:胍鹽一般是鹽酸胍或異硫氰酸胍。鹽酸胍迅速裂解細(xì)胞,變性蛋白,并抑制核酸酶活性。配合β-巰基乙醇還原蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的二硫鍵,從而使RNase變性。

特點(diǎn):得率高

適用范圍:次級(jí)代謝較少的植物組織,如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織、微生物。

二、常見抽提方法:

1.酚氯仿抽提(有機(jī)試劑抽提)

原理:將被裂解的生物樣本,混勻離心分相以后,RNA在上層水相,DNA,蛋白質(zhì)在中間層,下層有機(jī)相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA,漂洗后得到RNA。

優(yōu)點(diǎn):得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。

缺點(diǎn):用到苯酚、氯仿等有毒試劑。

2.硅膠柱法抽提

原理:硅基質(zhì)材料在一定的高鹽緩沖系統(tǒng)下高效、專一地吸附核酸。(高鹽低pH吸附核酸,低鹽高pH釋放核酸。

優(yōu)點(diǎn):操作簡單、安全無毒

缺點(diǎn):需配合高速離心機(jī)使用;提取的總RNA不含小于200nt的小RNA。

3. 磁珠法抽提

原理:納米微球磁珠材料表面涂上一層二氧化硅,使磁珠獲得吸附能力。

優(yōu)點(diǎn):磁場(chǎng)中快速分離,無需離心,可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。

缺點(diǎn):成本較高;提取的RNA可能殘存磁珠。

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