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細胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)有什么?

 更新時間:2023-09-21 點擊量:707

動物細胞在細胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。那么細胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)有什么呢?讓我們一起來看看吧!

一、pH

動物細胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在7.2~7.4之間。細胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計來測定。在細胞生長過程中,隨細胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強,二氧化碳不斷被釋放,培養(yǎng)液變酸,pH值發(fā)生變化。酚紅是細胞培養(yǎng)基中常用的pH指示劑,但依靠細胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進行判斷,需要實驗員的經(jīng)驗積累,存在較大的主觀性。實際上,個性化細胞培養(yǎng)基或是無血清細胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅,只能通過pH計或者pH電極進行pH值的檢測,結(jié)果更為準確可靠。

二、緩沖能力

 細胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細胞培養(yǎng)過程中造成細胞培養(yǎng)液 pH 波動的主要物質(zhì)是細胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,細胞培養(yǎng)液pH 很快下降;打開培養(yǎng)器具時CO2逸出則會引起pH升高。細胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細胞培養(yǎng)基的pH值:

H2O + CO2 → H2CO3 ? H+ + HCO3-

NaHCO3 ? Na+ + HCO3-

三、滲透壓

細胞必須生活在等滲的環(huán)境中,大多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓有一定耐受性。研究顯示,對于大多數(shù)哺乳類動物細胞,滲透壓在260~320 mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細胞培養(yǎng)基的過程中,滲透壓的測定較為重要,有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動物細胞過程,在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控,防止?jié)B透壓過高對細胞的損害。

四、溫度

溫度對細胞培養(yǎng)基有較大的影響,溫度過高可引起營養(yǎng)成份的降解或破壞,細胞培養(yǎng)基的pH、離子強度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺,在高溫條件下降解的速度較快,如35 ℃貯存時,放置3天降解25 %左右,在4 ℃貯存3周降解約20%。

五、粘滯性及表面張力

含血清細胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細胞時,培養(yǎng)液的粘滯性對細胞生長沒有多大影響;但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細胞時,細胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對細胞造成的損傷程度。

表面張力對細胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應(yīng)器進行懸浮培養(yǎng)時,攪拌和通氣都會引起泡沫的產(chǎn)生。對于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運動對細胞的損傷程度還有爭議,但氣泡的破裂對細胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷,可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑,降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力,減少氣泡的形成。

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