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你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎?

 更新時(shí)間:2023-10-07 點(diǎn)擊量:586

RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子,同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁,因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段,那么你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

以Trizol法提取組織細(xì)胞為例:

1.提取細(xì)胞RNA時(shí),先離心沉淀細(xì)胞,每5~106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后,反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞;

2.將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30℃下放置5分鐘;

3.在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2~8℃)離心15分鐘;

4.去上層水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15~30℃)放置10分鐘后,12000g(2~8℃)離心10分鐘;

5.棄上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進(jìn)行洗滌,渦旋混合,7500g(2~8℃)離心5分鐘,棄上清;

6.讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥;

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA檢測(cè)

(1) RNA的電泳圖譜,電泳的目的是在于檢測(cè)28S、18S、5S條帶的完整性和他們的比值,一般的,如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利,并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量是好的。

(2) 測(cè)定樣品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA計(jì)算RNA的產(chǎn)量,一般的OD260/OD280在1.8-2.0范圍,我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量是好的,如果R<1.8,說(shuō)明溶液中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染比較明顯,如果R>2.2,說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。

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