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Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的操作方法有哪些?

 更新時(shí)間:2024-01-02 點(diǎn)擊量:937

Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用于檢測(cè)懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡試劑盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的操作方法有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一步法

1.細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300 ×g 離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2.取 1~5 × 105 重懸的細(xì)胞,300 ×g 離心 5 min,棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。

3.細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-FITC Reagent和5μL的 PI Reagent (50μg/mL)。

4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育15~20 min。

5.立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC可用FITC通道,PI 優(yōu)先選擇PerCP/Cy5.5 通道,其次是ECD通道。

兩步法

1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300 ×g離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS 洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2. 取1~5 × 105重懸的細(xì)胞,300 ×g離心 5 min,棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入100 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 重懸細(xì)胞。

3. 細(xì)胞懸液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和2.5 μL的PI Reagent (50μg/mL)。(由于兩步法 分辨率更高,染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果;用戶亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后 加入適量的染色液,用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。)

4. 輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。

5. 加入 400 μL 稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer,混勻樣本。

6. 立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。 注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC 可用 FITC 通道,PI優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道,其次是 ECD 通道。

更多有關(guān)Elabscience Annexin V-FITC / PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的操作方法,請(qǐng)聯(lián)系Elabscience試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。


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