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碧云天BCA蛋白濃度測定試劑盒(P0012)產(chǎn)品介紹

 更新時間:2024-02-29 點(diǎn)擊量:1278

BCA蛋白濃度測定試劑盒是基于廣泛采用的BCA法開發(fā)的,為簡便、穩(wěn)定、敏感且兼容性強(qiáng)的蛋白濃度檢測提供解決方案。該試劑盒具有高靈敏度,可檢測濃度至25μg/ml,最小檢測量為0.5μg,樣品需1?20μl。

BCA法測定不受絕大部分化學(xué)物質(zhì)干擾,可兼容高達(dá)5%的SDS、Triton X-100、Tween 20、60、80。然而,試劑盒對螯合劑和高濃度還原劑敏感,需確保EDTA低于10mM,無EGTA,DTT低于1mM,β?Mercaptoethanol低于0.01%。這些特性確保了準(zhǔn)確測定蛋白濃度,并提供可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

操作使用:

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

a.取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中,充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用,也可以-20℃長期保存。

b.取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),加入980µl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長期保存。

2.BCA工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100μl BCA試劑B,混勻,配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

3.蛋白濃度測定

a.將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl,需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl。請注意記錄樣品體積。

c.各孔加入200μl BCA工作液,37℃放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置2小時,或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或適當(dāng)延長孵育時間。

d.用酶標(biāo)儀測定A562,或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

P0012

BCA蛋白濃度測定試劑盒

500


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