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碧云天 LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑(C0551-7.5ml)現(xiàn)貨供應(yīng)

 更新時間:2024-04-19 點擊量:485

產(chǎn)品名稱:碧云天LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑(C0551-7.5ml)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號:C0551

產(chǎn)品品牌:碧云天

產(chǎn)品簡介:

碧云天LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑是一種基于陽離子脂質(zhì)體等最新轉(zhuǎn)染技術(shù)的非常高效的新型昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑。本產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率高、操作簡單、細(xì)胞毒性低、重復(fù)性好,達(dá)到了國際最主流昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果。
本產(chǎn)品適用于將pFastBac1等桿狀病毒表達(dá)載體質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到Sf9、Sf21和High Five™等昆蟲細(xì)胞以用于Bac-to-Bac®、BaculoDirect™和InsectSelect™表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá)。
Bacmid轉(zhuǎn)染:
1. 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)(以六孔板為例,其它培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿可參考六孔板):按照每孔約80萬Sf9或Sf21細(xì)胞(具體的細(xì)胞數(shù)量據(jù)細(xì)胞類型、大小和細(xì)胞生長速度等而定)用正常的細(xì)胞培養(yǎng)液接種到六孔板內(nèi),使細(xì)胞密度能達(dá)到約70-90%。在27-28℃培養(yǎng),后續(xù)轉(zhuǎn)染和培養(yǎng)也在該溫度下進行。
2. 15分鐘后,將正常的細(xì)胞培養(yǎng)液更換為平板培養(yǎng)液(含1.5%胎牛血清不含抗生素的SFX-INSECT培養(yǎng)液)每孔0.8ml。

3. 對于待轉(zhuǎn)染的六孔板中每一個孔的細(xì)胞,取兩個潔凈無菌離心管,分別加入100μl不含血清和抗生素的SFX-INSECT昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)液用于稀釋bacmid和轉(zhuǎn)染試劑。其中一管加入16μg bacmid,并用槍輕輕吹打混勻;另一管加入8μl LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑,用槍輕輕吹打混勻,或者輕微Vortex混勻,但不可離心。稀釋的bacmid和轉(zhuǎn)染試劑室溫靜置約2-5min(最多不得超過30分鐘)。隨即把稀釋的bacmid用移液器輕輕加入到稀釋的LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑中,輕輕顛倒離心管或者用槍輕輕吹打混勻,室溫靜置15-30分鐘。

4. 按照六孔板每孔200μl LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑-bacmid混合物的用量,均勻滴加到整個孔內(nèi),隨后輕輕混勻。
5. 為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)3-5小時后宜更換為新鮮的wan全培養(yǎng)液(對于Sf9細(xì)胞,推薦在轉(zhuǎn)染4小時后更換培養(yǎng)液)。
6. 繼續(xù)在27-28℃培養(yǎng)約96小時后,收集每孔的培養(yǎng)液,500g離心5分鐘,獲得的上清即為P1代桿狀病毒(病毒滴度通常為1×106~1×107 pfu/ml)。P1代病毒4℃避光保存,如果包裝病毒時的細(xì)胞培養(yǎng)液為無血清培養(yǎng)液宜添加胎牛血清至終濃度為2%以保護病毒被蛋白酶降解。P1代病毒近期不使用的情況,可以適當(dāng)分裝后-80℃長期保存。盡量避免反復(fù)凍融病毒,反復(fù)凍融可能導(dǎo)致病毒滴度下降10-100倍。
7. 為獲得更高滴度的桿狀病毒,可以使用P1代病毒感染Sf9或Sf21細(xì)胞等來獲得P2代桿狀病毒(病毒滴度通常為1×107 ~1×108
pfu/ml)。具體操作請參照昆蟲細(xì)胞Bac-to-Bac Baculovious expression system的相關(guān)操作規(guī)程。大致的步驟為使用P1代病毒感染2×106個貼壁約1小時的Sf9或Sf21細(xì)胞,推薦的病毒的MOI為0.05-0.1,過高的MOI會導(dǎo)致獲得的病毒質(zhì)量下降。27-28℃培養(yǎng)48小時后,同步驟f收集每孔的培養(yǎng)液,隨后500g離心5分鐘,獲得的上清即為P2代桿狀病毒。P2代病毒的保存條件同P1代。由于桿狀病毒在每一代的擴增過程中均易出現(xiàn)缺少突變,因此推薦最多擴增至P3代病毒。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

C0551-7.5ml

LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑

7.5 mL


北京百奧創(chuàng)新科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)碧云天LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑(C0551-7.5ml),歡迎選購!

碧云天 LipoInsect轉(zhuǎn)染試劑(C0551-7.5ml)現(xiàn)貨供應(yīng)

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