亚洲欧洲日产国码无码久久99,欧美性人人天天夜夜摸,性久久久久久,男人激烈吮乳吃奶视频免费

免費咨詢熱線:
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > MLPA試驗步驟

MLPA試驗步驟

 更新時間:2024-08-12 點擊量:503


在上篇MLPA試驗原理中,我們已經(jīng)詳細(xì)介紹了MLPA技術(shù)。MLPA,即多重連接探針擴增技術(shù),是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測基因的拷貝數(shù)變異和序列變異。它結(jié)合了PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))和連接酶技術(shù),通過設(shè)計特定的探針來識別和擴增目標(biāo)DNA序列。下面讓我們一起來看看MLPA試驗步驟吧!

MLPA試驗步驟分為六步:變性、雜交、連接、PCR擴增、片段分離、數(shù)據(jù)分析。

一、變性

DNA標(biāo)本放入PCR儀中加熱5分鐘,使DNA雙鏈解鏈成單鏈。純化的樣本DNA被變性。

二、雜交

加入雜交反應(yīng)液。雜交反應(yīng)液包含SALSA MLPA探針混合液和SALSA MLPA緩沖液。每組MLPA探針混合物包含多達(dá)60對不同的MLPA探針,每個探針識別一個特異的靶序列。MLPA探針由兩部分組成:左探針和右探針寡核苷酸(LPORPO)。LPORPO包含PCR引物和DNA雜交序列。MLPA反應(yīng)中,左探針寡核苷酸(LPO)和右探針寡核苷酸(RPO)都與靶序列進行雜交。

三、連接

實驗第二天,加入連接酶反應(yīng)液。反應(yīng)液包括連接酶緩沖液A,連接酶緩沖液BSALSA連接酶Ligase-65。連接酶Ligase-65結(jié)合到與靶序列雜交的左側(cè)探針和右側(cè)探針上,催化產(chǎn)生一個共價鍵。隨后,通過加熱反應(yīng)液使連接酶失活,從而終止連接步驟。連接酶Ligase-65特異性非常高,只要雜交區(qū)域有一個核苷酸錯配,連接酶就不會連接兩段探針,使連接反應(yīng)具有高度特異性。正是由于這種高特異性,MLPA也可以用于區(qū)分序列高度相似的假基因,以及檢測特定的點突變。

四、PCR擴增

加入PCR聚合酶混合液。PCR聚合酶混合液包含SALSA PCR聚合酶及SALSA PCR引物混合液。PCR引物混合液中包含dNTPs、正向引物和反向引物。正向PCR引物帶有熒光標(biāo)記。所有連接上的MLPA探針均使用這對PCR引物進行指數(shù)擴增。PCR反應(yīng)包含變性、引物復(fù)性以及引物延伸,循環(huán)35次。熒光標(biāo)記被帶入到MLPA擴增產(chǎn)物,即MLPA擴增子中。

五、片段分離

擴增后,用毛細(xì)管電泳分離片段。毛細(xì)管電泳根據(jù)片段的長度進行分離,并將不同長度的片段顯示為峰值模式,稱為電泳圖。

六、數(shù)據(jù)分析

每個探針上的填充序列不同,每個擴增子都有不同的已知大小,因此在數(shù)據(jù)分析過程中可以對每個擴增子進行量化。毛細(xì)管電泳得到的數(shù)據(jù)將作為分析的輸入,輸入數(shù)據(jù)分析軟件Coffalyser。通過將每個樣本與一組參考樣本進行比較,我們可以得到一個探針比,這個探針比率將告訴我們一個基因有多少個拷貝數(shù)。由于大多數(shù)人類基因是二倍體,如果樣本有兩個拷貝,比例將為1.0,即樣本探針獲得的基因數(shù)量與參考樣本相同。如果比值為0.5,則該基因在個體中只有一個拷貝,這可能意味著目標(biāo)基因的雜合缺失。另一方面,如果這個比率是1.5,那么很可能存在一個基因的雜合復(fù)制。



性xxxx欧美孕妇奶水| 英语老师的小兔子好大好软水| 一本色道在线久88在线观看片| 亚洲色精品三区二区一区| 狠狠色丁香婷婷综合久久97 | 和子发生了性关系的免费视频| 国产精品情侣呻吟对白视频| 亚洲国产精品99久久久久久| 闺房床榻粗喘h娇女| 色戒在线免费观看| 未满十八18禁止免费无码网站| 精品夜夜爽欧美毛片视频| 久久性爱视频| 你的棒棒可以桶桶我的下水道| 国产伦精品一区二区三区不卡| asian艳丽的少妇pics| 国产麻豆一区二区三区精品视频| 日本人妻巨大乳挤奶水app| 被闺蜜男朋友强肉h高干| 全黄H全肉短篇禁乱NP慕浅浅| 国产老头老太作爱视频| 先の欲求不満な人妻在线| 成人欧美一区二区三区在线视频| 圣女当众被迫高潮h高| 故意穿暴露被强好爽h| 40岁的女人私密很紧致| 玩弄娇喘的白丝短裙老师小说| 最近高清无吗免费看| 蜜芽va亚洲va欧美va天堂| 欧洲美女与动交zoz0z| 日本丰满白嫩bbwbbw| 亚洲av无码专区在线观看成人| 免费b站在线观看人数在哪儿找| 丁香色欲久久久久久综合网| 国产老师色诱我好爽在线观看| 欧美iphonexsmax免费| 久久久久亚洲av成人网人人软件| 学生挺进老师的小窄肉里| 肥白大屁股bbwbbwhd| 三级国产三级在线| 被绑在机器上榨精失禁男男 |