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Toxin腸毒素的用途——作為超抗原

 更新時(shí)間:2024-12-23 點(diǎn)擊量:25
  Toxin腸毒素的用途——作為超抗原
  原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細(xì)胞增殖并釋放過量細(xì)胞因子,可用于抗腫瘤治療。T細(xì)胞活化通過暴露于特定抗原(例如Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB))來測(cè)定。SEB是一種細(xì)菌毒素,能夠與抗原呈遞細(xì)胞(APC)和TCR上的MHCII類分子結(jié)合,誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放,例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。
  應(yīng)用舉例:誘導(dǎo)活化T細(xì)胞
  一、將PBMCs(120 K/孔)與Nuclight綠色試劑標(biāo)記的Ramos細(xì)胞(40/孔)進(jìn)行共培養(yǎng)。使用CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE抗體或Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB)誘導(dǎo)活化。在60 h時(shí),使用T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)分析10µL樣本。
  每種活化因子會(huì)導(dǎo)致不同的CD3+T細(xì)胞蛋白表達(dá)和殺傷特征:
  1.CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對(duì)應(yīng)于最大的活化標(biāo)志物表達(dá)百分比。該結(jié)果與高水平的細(xì)胞耗竭標(biāo)志物呈現(xiàn)相關(guān)性。
  2.與Dynabead和SEB相比,CD3×CD19 BiTE抗體介導(dǎo)的靶細(xì)胞死亡增量最多,活化和耗竭水平顯著降低。這說明BiTE介導(dǎo)的免疫細(xì)胞殺傷時(shí)間可能持續(xù)的較長(zhǎng)。
  3.SEB刺激,即使在低濃度下,也可使T細(xì)胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率,導(dǎo)致高水平的T細(xì)胞耗竭。
 

 

  二、使用來自T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒的Qbeads測(cè)定Nuclight綠色標(biāo)記的Ramos和PBMC(3:1比例)共培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個(gè)試劑盒中均檢測(cè)了IFN?和TNFa的濃度,以便將所有試劑盒的測(cè)定結(jié)果取平均值。
  各個(gè)活化因子對(duì)細(xì)胞因子分泌和對(duì)表面蛋白表達(dá)的影響相當(dāng):
  1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi),CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放呈濃度依賴性增加。
  2.與微球或SEB相比,CD3×CD19 BiTE刺激后的細(xì)胞因子釋放始終較低(最高刺激濃度下的顆粒酶B濃度除外)。該結(jié)果表明,在降低毒性風(fēng)險(xiǎn)的情況下(例如細(xì)胞因子釋放綜合征),可以實(shí)現(xiàn)高水平的細(xì)胞殺傷。
  3.SEB可誘導(dǎo)高水平的細(xì)胞因子釋放(即使在低濃度下)。
 

 

  三、將PBMCs(25 K/孔)與貼壁AU565細(xì)胞(5 K/孔)進(jìn)行共培養(yǎng)。使用SEB誘導(dǎo)T細(xì)胞活化。在60 h時(shí),使用T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)提取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞,進(jìn)行終點(diǎn)分析。
  SEB活化誘導(dǎo)靶細(xì)胞殺傷呈濃度依賴性增加,伴隨CD3+T細(xì)胞上活化(CD69、CD25和HLA-DR)和耗竭(PD-1、LAG-3和TIM-3)標(biāo)志物的高表達(dá)(在所有使用的SEB濃度中均是如此)。
 

 

  其他應(yīng)用:抗體制備、毒素檢驗(yàn)、多種免疫和偶聯(lián)試驗(yàn)、藥物研發(fā)等。
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