亚洲欧洲日产国码无码久久99,欧美性人人天天夜夜摸,性久久久久久,男人激烈吮乳吃奶视频免费

免費咨詢熱線:
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > PCR反應體系包括什么

PCR反應體系包括什么

 更新時間:2024-06-06 點擊量:1145
  PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內(nèi)DNA的半保留復制過程,以擬擴增的模板DNA分子,與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系,經(jīng)過重復地變性一退火一延伸三步,擴增新的目的DNA鏈,這個過程通過控制反應體系的溫度來實現(xiàn)。那么你知道PCR反應體系包括什么嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  一、模板(template)
 
  模板即擴增用的DNA,可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA(如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等),但必須符合兩個條件:一是純度必須較高,二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴增的目的基因或特異片段,如診斷病人是否攜帶有突變基因時,其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高,但應盡量不含有對PCR反應有抑制作用的雜質(zhì)存在,如蛋白酶、核酸酶、Taq DNA聚合酶抑制劑、能與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。
 
  二、引物(primers)
 
  人工合成的一對引物可以分別與兩條模板DNA互補結(jié)合的寡核苷酸序列,其中一條稱為上游引物,另一條稱為下游引物。引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。引物濃度一般為0.1~0.5umol/L,濃度過高會引起錯配和非特異擴增,濃度過低則得不到產(chǎn)物或產(chǎn)量過低。引物長度一般為15~30bp,引物過長或過短都會降低特異性。其3'末端一定要與模板DNA配對,末位堿基最好選用A、C、G(因T錯配也能引發(fā)鏈的延伸)。引物GC占45%~55%,堿基應盡量隨機分布,避免嘧啶或嘌呤堆積,兩引物之間不應有互補鏈存在,不能與非目的擴增區(qū)有同源性。
 
  三、底物(dNTP)
 
  dNTP包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP。dNTP溶液呈酸性,使用時應配成高濃度后,以1mol/L NaOH或1mol/L Tris-HCl的緩沖液將其pH調(diào)節(jié)至7.0~7.5,小量分裝,-20℃冰凍保存。一般存儲濃度為10mo/L,各成分以等當量配制,反應終濃度為20~200umol/L,如其中任何一種濃度不同于其他幾種時(偏高或偏低),就會引起錯配。高濃度可加速反應,但同時增加錯誤摻入和實驗成本;低濃度可提高精確性,而反應速度會降低。
 
  四、PCR緩沖液(PCR buffer)
 
  緩沖液的成分最為復雜,除水外一般包括四種有效成分:①緩沖體系,一般使用HEPES或MOPS緩沖體系;②一價陽離子,一般采用鉀離子,但在特殊情況下也可使用銨根離子;③二價陽離子,即鎂離子,根據(jù)反應體系確定,除特殊情況外不需調(diào)整;④輔助成分,常見的有DMSO、甘油等,主要用來保持酶的活性和幫助DNA接觸纏繞結(jié)構(gòu)。
 
  更多有關(guān)PCR反應體系包括什么,請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司!
欧美喷潮久久久xxxxx| 我和小雪的故事| 啊灬啊灬啊灬快灬深用力| 欧美精品乱码99久久蜜桃| 亲女禁h啪啪| 丰满少妇大乳高潮在线| 强行挺进朋友漂亮的娇妻| 少妇wwb搡bbbb搡bbbb| 日韩av在线观看| 特黄a三级三级三级视频| 放荡的小峓子在厨房伦理| 人妻を催眠えっちに孕ませるまで| 啦啦啦www在线观看| av无码av天天av天天爽| 大肉蒂被嘬的好爽h娇门吟| 亚洲va欧美va天堂v国产综合| 奇米777狠狠888俺也去| 我把五十老女人弄高潮了| 荡货 喂奶 h| 暴躁老阿姨csgo| 99久久国产热无码精品免费| 亚洲香蕉中文日韩v日本国产| 国产精品国产亚洲精品看不卡| 高h各种姿势调教1v1| 欧美bbbwbbwbbwbbw| 国精品无码人妻一区二区三区| 五十路六十路老熟妇a片| 久久久久免费毛a片免费一瓶梅 | 王妃暗卫肉h共妻大肉| 欧美变态口味重另类在线视频| 久久久久亚洲av成人网人人软件| 中国熟妇xxxx| 评书三国演义袁阔成播讲365集| 高清在线播放| 成人欧美一区二区三区在线视频| 久久亚洲av午夜福利精品一区| 麻豆春药按摩无码AV片| 10000拍拍18勿入免费看| 三上悠亚在线观看| 欧美疯狂性受xxxxx喷水更猛| 熟妇的滚烫的肉唇翻进翻出|